BOSS的挑战地点与其特性和游戏进度密切相关。史莱姆王作为首个可挑战的BOSS，通常在地表或浅层地下生成，但需使用史莱姆王冠主动召唤或在史莱姆雨事件中击杀足够数量的史莱姆后自然出现。克苏鲁之眼则会在夜晚随机生成于地表，前提是玩家满足血量、防御和NPC居住条件，也可通过可疑眼球手动召唤。腐化/猩红之地的BOSS需深入对应地形破坏暗影珠或猩红之心，或使用特定召唤物在对应区域激活。蜂后必须在地下丛林的蜂巢内破坏幼虫触发，而骷髅王仅能在地牢入口夜晚与老人对话召唤。肉山作为难度分界点，必须在地狱层将向导巫毒娃娃投入岩浆召唤，且战斗全程需停留在地狱环境。
困难模式前的BOSS挑战需注重地形准备。地牢入口需搭建平台便于对抗骷髅王，腐化/猩红地形建议清理出开阔空间以应对多段体节的吞噬怪或克苏鲁之脑。丛林蜂巢需提前破坏周边障碍物创造战斗场地，地狱则需铺设超长平台应对肉山的直线冲锋。神圣之地的史莱姆女皇需利用明胶水晶召唤，而雪原生物群系的鹿角怪则需使用鹿华激活。所有场地建设需考虑BOSS的穿墙能力与攻击范围，平台间距建议保持6-8格以优化移动效率。
进入困难模式后，机械三王的召唤具有特定条件。双子魔眼、毁灭者和机械骷髅王会在夜晚随机出现，也可通过机械眼球、机械蠕虫和机械骷髅头主动召唤。世纪之花的挑战必须在地下丛林寻找粉色花苞，石巨人则需在丛林神庙使用蜥蜴电池激活祭坛。猪龙鱼公爵需在海洋生物群系用松露虫钓鱼召唤，光之女皇则需在神圣地表捕捉七彩草蛉。拜月教徒仅在地牢入口满足石巨人击败条件后生成，四柱事件则在击败教徒后自动触发。月亮领主的出现需摧毁全部天界柱，且战斗会覆盖整个地图空间。
最终阶段的BOSS挑战需系统性准备。天界柱区域的战斗需先清理150只对应敌怪破除护盾，月亮领主的战斗则需应对全屏攻击。事件类BOSS如南瓜月的哀木和霜月的冰雪女王，需通过相应奖章在夜晚激活。海盗入侵和火星暴乱等事件中的BOSS会随进度自动出现，而撒旦军队事件中的食人魔和双足翼龙需在埃特尼亚水晶台激活。所有终极战斗建议配备自动瞄准武器和跨屏位移装备，并建立多层平台应对三维空间威胁。
BOSS的刷新机制与游戏阶段深度绑定。部分BOSS如史莱姆王和克苏鲁之眼在满足条件后会概率自然生成，而机械三王在未手动召唤时也会随机出现。世纪之花和石巨人属于进度锁定型BOSS，必须击败前置BOSS才会激活。事件BOSS受时间限制，需在特定夜晚完成挑战。游戏内BOSS图鉴会按解锁顺序排列，向导的提示和成就系统也能辅助判断挑战时机。合理规划挑战路线可显著提升装备获取效率，但高难度模式下仍需根据实际战斗表现调整策略。
